蛋白印迹杂交检测服务
倍沃医学技术人员,在样品处理、转印和抗体稀释比例等操作上具有特殊的技巧,能够为客户的样品量身定制实验方案。

蛋白质印迹法(免疫印迹实验)即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术,现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。

基本原理:

通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。

虽Western Blot方法非常成熟,且大多实验室均具备Western Blot的实验能力。但是要得到一份背景清晰、条带明亮、真实客观的实验结果,需要投入大量的时间和精力,倍沃医学技术人员,在样品处理、转印和抗体稀释比例等操作上具有特殊的技巧,能够为客户的样品量身定制实验方案。

Western Blot实验流程

1)蛋白质抽提 

A、实验对象为组织样品,取适量(250-500 mg)新鲜组织样品,加1 mL含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂),匀浆后抽提总蛋白。 

B、实验对象为细胞样品,每份样品取1×10^6~1×10^7细胞,PBS清洗细胞,去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂)抽提总蛋白。 

2)蛋白质定量

按蛋白质定量试剂盒操作说明操作,测定样品浓度。 

3)变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE) 

将准备好的样品液和生物素标记的蛋白质分子量标准分别上样,标准加进第一个孔中,电泳分离蛋白。 

4)蛋白质转移到硝酸纤维膜或PVDF膜 

5)膜的封闭和抗体孵育 

A、膜在5%BSA溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合。 

B、封闭过的膜加入一级抗体室温孵育1.5小时,抗原抗体结合。 

C、加入HRP标记的二级抗体以结合一级抗体及HRP标记的抗生物素抗体以结合分子量标准,室温孵育膜1小时。加入HRP标记的GAPDH抗体可同时检测GAPDH含量。

6)结果检测

化学发光法检测,膜与化学发光底物孵育,经X胶片曝光显影。 

7)提供实验报告

包括详细的实验方法及Western Blot实验结果。

服务内容及价格:

western blot.png

客户需自己提供一抗,或由倍沃医学提供。我们免费提供标记二抗和内参抗体α-Tublin,β-actin,GAPDH。

服务说明:

1)送样要求:

1.1 样品以冰盒形式运输;

1.2 样本量:组织>300 mg;液体>1 mL;

1.3 送样前,确保样品均一性与标签清晰;

2)欢迎询价:

如果您的样品数量较多,请联系技术人员400-115-2855,享受折扣优惠!

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